PCR dijagnostika - analiza na infekcije

lančane reakcije polimeraze (PCR) - preciznost pomoću molekularnih genetska dijagnoza, koja omogućuje osobi da se identifikuju različite infektivne i nasljedne bolesti, akutni i kronični faze i dobro prije nego što se bolest može manifestirati.

lančane reakcije polimeraze (PCR) 1983. godine razvio Myullis Cary (SAD), za koji je 1993. godine dobio je Nobelovu nagradu za hemiju.

PCR analiza za većinu infekcija postala neka vrsta "zlatni standard". Većina stručnjaka se suočavaju s njim skoro svaki dan i nisu bez definitivne dijagnoze. PCR je često jedina reakcija za detekciju aktivne faze bolesti u trenucima kada drugi ne bakteriološke, virusoloških i imunoloških dijagnostičkih metoda.

Prednosti dijagnostike PCR u modernoj medicini:

• Direktna detekcija prisutnosti patogena (i.e., određeni dio DNK ili RNK patogena) u uzorku.
• Visoka specifičnost vam omogućava da definišete jedinstveni potezu DNK ili RNK karakteristika specifičnih patogena koji eliminiše mogućnost lažno pozitivnih rezultata.
• Visoka osjetljivost PCR metodom može otkriti čak i pojedinačne ćelije patogena (virusi, bakterije). Osjetljivost PCR je 10-1000 u uzorku ćeliji (npr osjetljivost imunološke ispitivanja i mikroskopski - samo 103-105 ćelija).
• Razvoj tehnike Univerzalni PCR za detekciju različitih patogena. Cilj studije za PCR je genetski materijal (DNA, RNA) patogena. Metoda omogućava da se identifikuju nekoliko patogena iz biološkog uzorka.
• rezultati proizvodi dovoljno brzo analizu. Punu istragu se vrši za 4-4.5 sati, najmanje - malo duže.
• Sposobnost za otkrivanje patogena od simptoma bolesti (predkliničkim dijagnostika), a zatim prenosive bolesti (retrospektivna dijagnoza). Primjer pretkliničkih dijagnoza će biti ispitan u periodu inkubacije (od trenutka infekcije do pojave pritužbe pacijenta), kao i latentne infekcije (kada nema simptoma na sve, ali samo laboratorijskih podataka - PCR, na primjer). Jedan od vrhunaca PCR dijagnostika obavlja PCR u arhivske građe ili bioloških ostataka, što je važno za identifikaciju ili očinstvo.

Trenutno, PCR dijagnoza prolazi značajan razvoj. Going poboljšanje metoda, vrijeme i ponovo postoje nove sorte PCR, medicinski tržište dobiva novi test sistem za ovu reakciju. Tako troškove analize je da postanu dostupni na širok spektar pacijenata svake godine.

Ono što je osnova PCR metoda

Osnova za lančane reakcije polimeraze se ponavlja udvostručenje (pojačanje) određenog dijela DNK ili RNK putem enzima in vitro. Rezultat je količina DNK ili RNK dovoljna za vizuelnu analizu. Studija se kopira samo dio koji odgovara određenim uslovima, i to samo u situaciji njegovo prisustvo u ispitivanom uzorku.

Na primjer, materijal za proučavanje, sumnja da sadrže fragmenata DNK ili RNK patogena (pljuvačka, krv, urin, genitalni pražnjenje) se nalazi u posebnom reaktoru (amplifikatoru DNA). Dalje uz nju se dodaju specifične enzime koji se vezuju za moguća DNK patogena ili RNK, i sintezu njegove kopije. Ona dolazi u nekoliko faza tipa "lančanu reakciju", i na kraju jedan primjerak genetskog materijala mogu formirati i stotine hiljada primjeraka. Onda dolazi analiza i usporedba rezultata sa dostupnim baze podataka o strukturi različitih patogena. Putem PCR je moguće ne samo identificirati vrstu patogena, ali i da daju kvantitativni rezultat analize, koja je, koliko patogena u ljudskom tijelu.

PCR trenutno proširuje krug mogućnosti istraživanja u uvodu mutacija, furnirom DNK fragmenata, i široko se koristi u medicini, na primjer, utvrđivanja očinstva, pojava novih gena i tako dalje.

Šta infekcija može se otkriti PCR dijagnostiku

1) HIV infekcije (može otkriti virus humane imunodeficijencije HIV-1)
2) virusni hepatitis A, B, C, G (RNA-HAV, DNK-HBV, RNK-HCV, RNA-HGV)
3) infektivne mononukleoze (Epstein-DNA Barr -VEB)
4) Citomegalovirusna (DNA-CMV)
5) Herpes infekcija (herpes simplex virus DNK HSV tip 1 i 2)
6) STI (seksualno prenosive infekcije po) - ureaplasmosis, bakterijske vaginoze, klamidije, mikoplazmoze, trihomonijaza,
7) tuberkuloze (Mycobacterium tuberculosis)
8) Onkogeni Virusi - papiloma virus infekcija (humani papiloma virus (uključujući onkogeni tipovi 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, i 59)
9) borelioza, krpeljskog encefalitis
10) Listerija
11) Candida (gljiva Candida roda)
12) Helicobacter infekcije (Helicobacter pylori)
i drugi

S obzirom na opseg patogena, PCR dijagnostika je naširoko koristi u ginekološkoj, uroloških praksa, praksa, infektivne bolesti, pulmologije, TB, gastroenterologije, hematologije, onkologije i drugi.

Materijal za proučavanje i pravilima svoje ograde

Materijal za PCR analiza, koji može identificirati strane DNK bakterije ili DNK ili RNK virus može služiti različitim biološkim okoliš i ljudsko tekućine: sluz, urin, krv, ispljuvak, struganje epitelnih stanica, tkiva, placenta, krv, sok prostate, plodove vode, pleuralni tekućine.

Kada skrining za seksualno prenosive infekcije (SPI) između muškaraca i žena su preuzete iz genitalnih organa, a bris ili strugati od cervikalni bris ili sastrugati iz uretre (uretre), urin.

Kada skrining za infekcije (herpes infekcija, CMV infekcije, mononukleoza, toksoplazmoza, hepatitis B i C, HIV) PCR povući krv.

Za dijagnozu infektivne mononukleoze, citomegalovirus infekcije, herpes infekcija grla bris se uzima za skrining za CMV - urina. Često, za anketu na nervni šteta sistem u velikom broju studija uzeti likvora.

U pulmologije materijal je ispljuvak, pleuralni tekućine.

Kada skrining za fetalne infekcije - plodove vode, tkivu posteljice.

Priprema za isporuku materijala i sprovođenje PCR dijagnostiku

Gotovo svi pacijenti podvrgnuti PCR dijagnostiku, mogu računati na pouzdan, precizan i brze rezultate, što ovisi u velikoj mjeri o mogućnosti laboratorija, stručnih laboratorija doktora. U isto vrijeme, mnogi ne shvataju da najpouzdaniji u velikoj mjeri ovisi o nama samima, naime, na preporukama prisutnih doktora, način života, a ispravnost ograde materijala. Kada ograde materijal propisane uslove bez kontaminacija (zagađenje) materijala i, prema tome, dovodeći u pitanje objektivnost analize.

Pravilna priprema za isporuku materijala ne predstavlja nikakve poteškoće. preporuke sljedeće doktora za pacijente:

1) nije na seksualni odnos dan prije datuma materiala-
2) krv za istraživanje bavio ujutro na prazan želudac (ne jesti, piti) -
3) U vrijeme kada je prvi jutarnji urin ide dio u čistu sterilnu posudu.

Termini spremnost PCR

Krajnji rezultat je spremna u 1,5-2 dana nakon isporuke materijala. U nekim slučajevima, rezultat je spreman za prvi dan.

Dešifriranje rezultata PCR

negativan PCR rezultat pokazuje da ispitnog materijala u vrijeme isporuke nisu pronašli tragove infektivnih agenasa. Većina slučajeva pokazuje nedostatak infekcije, koja pokušava pronaći u ispitivanom uzorku.

pozitivan PCR rezultat ukazuje na otkrivanje tragova infekcije u test biološkog uzorka. Sa velikom preciznošću pozitivan rezultat ukazuje na prisustvo infekcije u datom trenutku.

Postoje situacije kada je PCR pozitivan, ali aktivne infekcije ne može govoriti - tzv "zdrava nosač" bez kliničkih simptoma bolesti, koja ne zahtijeva liječenje, ali zahtijeva dinamičan praćenje od strane doktora. Javlja se češće u velikom broju virusnih infekcija (HPV, CMV, EBV infekcije, herpes infekcija, i drugi) u materijalima kao što su pljuvačke, struganje cerviksa, uretre, to jest, od lokalnog fokusa. Međutim, ne smijemo zaboraviti da je prijenos infekcije od nosača do zdravih ljudi mogu, kao prelazak na hronične oblik bolesti s procesom aktivacije. Ako je PCR pozitivan u krvi, onda nije ni nosač, i zahtijeva poseban tretman.

Kvantitativni PCR se procjenjuje doktor pojedinačno za određenu infekcije odvojeno i nema zajedničku gradacije. Na osnovu rezultata kvantitativnog PCR lekar može odrediti nivo aktivnosti infekcije i izložiti fazi bolesti, što svakako utiče na tok i droge doze propisane na bazi.

Jedan od poslednjih pitanja od interesa: kako precizno PCR dijagnoza?

3 ne postoji definicija za analizu PCR:

1. Preciznost (uz velika vjerovatnoća može identificirati ili odsustvo infekcije).
2. specifičnost (preciznost otkrivanja određene infekcije).
3. Osjetljivost (čak i na niskim nivoima patogena genetskog materijala u uzorku je otkrivena infekcija).

Lančana reakcija polimeraze se gotovo ne daje lažno pozitivnih rezultata (tj, nema pozitivnih uzoraka gdje je infekcija odsutan). Lažno negativni rezultati su rijetki (najčešće je to zbog nedostatka aktivne infekcije kod ljudi u ovom trenutku). Na primjer, latentne infekcije, hronične infekcije je aktivan.