Linked imunološkom testu (ELISA)

Linked imunološkom testu (ELISA)

Trenutno, ELISA se koristi u sljedećim situacijama:

1) Pretraga specifičnih antitijela na bilo infekcije zabolevaniyu-
2) tražiti antigene bilo bolesti (zarazne bolesti, venerične) -
3) studija hormonski status patsienta-
4) skrining za onkomarkery-
5) testiranje na prisustvo autoimunih bolesti.

Prednosti ELISA:

1) Visoka specifičnost i osjetljivost ELISA (preko 90%).
2) Sposobnost da se utvrde i prate dinamiku procesa bolesti, i.e. u odnosu na količinu antitijela u različitim vremenskim intervalima.
3) ELISA dijagnostički dostupnost u bilo koje zdravstvene ustanove.

Relativni nedostatak:

1) Otkrivanje imunološku reakciju (antitijela), ali ne i patogena.

osnovni pojmovi

Prije nego što se razjasni suština ELISA metodom, kratko je shvatiti neke pojmove.
Antitijela (ili imunoglobulini - Ig) - specifičnih proteina u produkciji B -
limfocita (imune ćelije) kao odgovor na ulazak u tijelo zarazne patogena (virusa, bakterija, gljivica i sl.) Luče imunoglobulin A (IgA), imunoglobulin E (IgE), imunoglobulin M (IgM), imunoglobulina G (IgG), imunoglobulin D (IgD). Oni se razlikuju jedni od drugih i formiraju molekulskom masom poluživot učešće / neučestvovanje u infektivnih procesa, otkriti vremena od trenutka infekcije. Ako uzmemo u obzir molekularne težine, najviše je IgM - je pentamer (950.000 Da), za razliku od ostatka Ig (150-200 000 Da), tako IgM jednostavno ne mogu proći kroz placentu. Stoga, otkrivanje IgM kod djeteta 1 godine života je uvijek znak infekcije u fetusa. Najveći seruma imunoglobulina je predstavljen IgG (75-85%), a najmanji - IgE (0,003%). Zarazne proces direktno uključeni uzimajući samo IgA, M, G. IgE su znak alergijske reakcije i uvjete, i IgD - može se otkriti samo u limfnim čvorovima i krajnika tkiva, igra ulogu u formiranju lokalnog imuniteta.

klase imunoglobulina

antigeni - visoke molekularne težine organskih supstanci, posebno zaraznih patogena i drugih bolesti, kao i različitih supstanci izmijenjena ćelija proizvedenih u datoj bolesti (autoimuna bolest, rak).

imuni kompleks - antigen-antitijelo koji su uključeni u imunološki proces.

Na ono što je ELISA metodom.

Postoji nekoliko varijanti ELISA (direktna, indirektna, blokiranje metoda konkurenti), ali u praksi se najčešće koriste heterogena enzim imunoanaliza ili ELISA (enzim povezan imunosorbentnim test)

Osnova imunoanaliza imunog odgovora antigena i antitijela da se formira imuni kompleks: antigen-antitijelo, što je dovelo do promjene u enzimsku aktivnost specifične oznake na površini antitijela.

Suština ELISA metodom

Jednostavno rečeno, ovaj proces može se podijeliti u nekoliko faza:

1) Na površini ploče doktora-rupa, ispitivač je pročišćena antigen specifičan patogen. Kada dodajete biološki materijal (krv u serumu) pacijenta specifičnih reakcija javlja između antigena i željeni antitijela (imunoglobulina). Ova veza će djelovati kao "specijalni antigen" u narednoj fazi.

2) U ovoj fazi je formiranje IR (imuni kompleksi) - reakcije između "specifični antigen" i konjugata (ovo imunoglobulina označen sa peroksidaza enzima). Dodao je poseban hromogen. Rezultat ove enzimskih reakcija je formiranje obojenih materija u bunarima ploče, od kojih je intenzitet boje ovisi o broju imunoglobulina pacijenta (antitijela) koje se nalaze u materijalu.

3) Dodatno postoje Tumačenje: fotometrija koristeći višekanalne spektrofotometar u odnosu na optičke gustine testa materijala sa optička gustina kontrolnih uzoraka, matematičke obrade rezultata. Iznos od antitijela u pacijenta zavisi od visine optičke gustine bunara.

Obično u praksi, korištenje 96 i ploča.

Kada mjerenja optičke gustoće (OD) izračunati uzorak tečnost količina (ili koncentracija) specifična antitijela u jedinici zapremine. Rezultat je tada u odnosu na kontrolni uzorak.

Valja imati na umu:za svaki test sistem razvijen kako bi uzeti u obzir rezultate pojedinačnog učinka, standarda učinka i patologije (tj "referentna vrijednost"). Ovo bi trebalo uzeti u obzir prilikom procjene rezultata svake studije slučaja. Pravilno interpretirati rezultate laboratorijskog "referentne vrijednosti" drugoj laboratoriji. Također je neispravna za usporedbu rezultata iz različitih laboratorija zajedno.

Prilikom postavljanja ELISA reakcije i ima vrijednost takvog koncepta kao lakomost antitijela.
lakomost antitijela - obveznica snagu antitijela na antigen i iznos antigen nalazi u povezanost sa immnoglobulinami (antitijela). Lakomost je od velikog značaja prilikom procjene navodne infekcije termina, što je izuzetno važno u dijagnostici primarne infekcije u trudnica.

Osnova lakomost test antitijela se sastoji od tretiranja imuni kompleks (antigen-antitijelo) uree u cilju da uništi proteina. Vysokoavidnye veze ostaju netaknuti i nisku lakomost uništena. Rezultat se navodi kao indeks lakomost, izražena kao postotak (%).

Šta bolesti se otkriju ELISA-dijagnostike?

1. infektivne bolesti
1.1 virusni hepatitis A (IgM, G), B antigene -HBsAg, HBeAg, antitela - IgM HBcorAg, Ig ukupno HBcorAg, IgG HBeAg), C (antitijela Ig M, G HCV), D (IgM, G), E (Ig M, G) i drugi.
1.2 HIV infekcije (IgG)
1.3 Citomegalovirusna infekcije (antitijela IgM, G)
1.4 Epstein-Barr infekcije ili mononkleoz (antitijela IgM, G EA, VCA, NA virusnih proteina)
1.5 herpetični infekcije (antitijela IgM, G)
1.6 Toksoplazmoza (antitijela IgM, G)
1.7 rubeola (IgM, G)
1.8 Ospice (IgM, G), bruceloze (IgM, G), Pseudotuberculosis (IgM, G), salmoneloze (IgM, G), Shigellosis ili dizenterija (IgM, G), aspergiloza (IgM, G), krpeljnog encefalitisa, borelioza i mnoge druge.
1.9 paraziti (giardiasis, toksokariaza, trihineloza, opistorhoz, ehinokokoze, alveococcosis i drugi) u kojima su otkrivene IgG
1.10 STD (spolno prenosivih bolesti kroz) - Mycoplasmosis (IgM, G), Ureaplasmosis (IgM, G), Chlamydia (IgA, M, G), sifilis (IgG)
1.11 Helicobacter infekcije (IgG)

2. markeri autoimunih bolesti i ljudski imunološki sistem pokazatelja (Ukupno IgE, ukupno IgG, ukupni IgA, ukupni IgM, ukupno IgD, sekretorni IgA, IgG 2, IgG4, CRC kruži imuni kompleksi, IgA i IgG antitijela na glijadinskih i drugi)

3. Onkologichsekie markera (TNF - faktor tumorske nekroze, HUP - karcinoembriogeni antigen, PSA - prostata specifičnog antigena, hCG - ljudski horiogonadotropina, CA 125, alveomutsin i mnogi drugi)

4. reproduktivnih poremećajaI (estradiol, progesteron, prolaktin, testosteron, AFP AFP, FSH - folikul-stimulirajućeg hormona, i drugi)

5. štitne žlijezde bolesti (Slobodni i vezani T3, T4, tireoglobulin, štitnjače peroksidaze - TPO, štitnjače stimulirajućeg hormona - TTG).

Ova lista je ni na koji način sve bolesti se dijagnosticira ELISA.

Materijal za analizu ELISA i vladavine ograde njegove

Najčešći materijal za reakciju IFA - pacijenta serum, uzeti na prazan želudac. Materijal može poslužiti i kao likvora, plodove vode, staklastog sadržaja, sluz cervikalnog kanala i uretre briseve.

Priprema pacijenata za isporuku materijala za IFA

Krv se uzima na prazan želudac. Prije isporuke krvi ne treba uzeti drogu. Poseban tretman (antibakterijsko, antivirusno, Antiparazitni, i tako dalje) mora biti zaustavljen najmanje 2 tjedna prije studija.

IFA rokovima izrade

Imunosorbentnim test materijal se održava brzo tokom dana. Kašnjenje može biti u različitim laboratorijima zbog akumulacije određene količine serumu.

Mogući rezultati ELISA dijagnostiku

U procjeni rezultata specifičnih infekcija je važno klasu antitijela identificirane i njihov broj. To utiče ne samo na pitanje etiologije infekcije (tj to ili ne), ali je procijenjena fazi bolesti (akutne i hronične), kao i prisustvo aktivne infekcije (akutna ili egzacerbacije kroničnog) u vrijeme istraživanja.

Koji su približne vremena antitijela (imunoglobulini - Ig)?

Najraniji IgM antitijela su. Oni mogu identificirati kroz 1-3 tjedna nakon što je moguće infekcije koje karakteriziraju akutnoj fazi infekcije. Druga situacija je pojava IgM - aktiviranje (ili pogoršanje) hronične proces. IgM antitijela kruže u prosjeku oko 3 mjeseca, onda je njihov broj se postepeno nestaje. Međutim, kod nekih pacijenata, tragovima IgM se mogu otkriti u roku od 1-2 godina nakon infekcije.

Moderni test sistemi su vrlo osjetljivi, tako da ima nespecifični lažno pozitivnih rezultata (često kod trudnica). Dakle, pozitivan IgM u ovoj grupi bolesnika treba ponovno provjeriti!

IgA antitijela pojavljuju 2-4 tjedna nakon infekcije, ali u iznosu koji je dovoljan da otkrije - mjesec dana. Serum IgA sintetiziraju plazma ćelije slezine, limfnih čvorova i sluzokože sekretorni IgA koncentriran na sluzokožu da obavlja svoju zaštitnu funkciju - uključeni u lokalnog imuniteta.

Na 4. sedmice nakon zaraze početi da se pojavljuju IgG antitijela. U većini infekcija titar postepeno povećava, sa maksimalnim u različito vrijeme (u prosjeku 1,5-2 mjeseca), onda je titar ostao na niskom nivou i ukazuje na imunitet. U nekim bolestima (mikoplazmoze, klamidija, trihomonijaza) nivo IgG nije visoka, je značajno smanjen zbog nedostatka imuniteta u ovih infekcija.

detekcija antitijela različitih klasa oličenje:

- detekciju antitela izolovana IgM ukazuje na postojanje primarnog
infekcije.
- Istovremenu detekciju IgM krvi i IgG tipično za primarne infekcije
u proteklih 2-3 mjeseci, kao i pogoršanje kroničnih bolesti. Dakle, prisutnost IgM u trudnoći nije uvijek pokazatelj početne infekcije.
- Otkrivanje IgG izolirani i može ukazati na imunitet na bolesti,
i hronične infekcije. U drugoj situaciji se postavlja i količinu antitijela (titra) i promjene u dinamici titar. Tipično, studije su sprovedene u intervalu od 2-4-6 tjedana.
- Otkrivanje IgA ili IgM izolovana ukazuju na primarne infekcije. u
zajedno sa pojavom IgA IgG pretpostavlja aktiviranje hronične infekcije (prosjek 2 tjedna od trenutka pogoršanja).

definicija IgG lakomost antitijela je savršen dodatak dijagnozu primarne fazi infekcije dugotrajnih infekcija koja ima klinički značaj, pogotovo prilikom procjene rizika od intrauterine infekcije fetusa. Detekciju niskog lakomost IgG pokazuje primarne infekcije i identifikuje u prosjeku nakon 4-6 mjeseci nakon infekcije, rijetko duže. Niske lakomost IgG zahtijevaju druge laboratorijske dokaze primarne infekcije (IgM). Visoke lakomost antitijela su ili znak kroničnih bolesti i akutne ili formira imunitet.

Posebno kod novorođenčadi:u djece mlađe od godinu dana, a ponekad čak 1,5 godina u krvi kruži majke IgG antitijela na različite infekcije (tj bilo je njihov prodor kroz placentu od majke na fetus u maternici). To nije samo po sebi znak prisutnosti infekcije u sadašnjosti. Ako u dobi od takjm otkrivenih IgM (Podsjećamo da majke IgM prolazi kroz placentu ne mogu), to je znak infekcije ili intrauterine infekcije stečene nakon rođenja.

Kvantitativni ELISA metodom

Rezultati ELISA dijagnostiku (koristeći enzim imunoanaliza analizatora) izdaje se u posebnim jedinicama:
- Optičke gustoće (OD) uzorka - koncentracije specifičnih antitijela po jedinici zapremine. Što je veći promjer uzorka, to je veća koncentracija antitijela. Neki rezultati ukazuju faktor pozitivnosti (CP) - je i optička gustoća uzorka.
- Jedinice koncentracije antitijela (ng / ml ili ng / ml).
- U serum titar: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 i tako dalje. Dijagnostički titar (na kojoj je dijagnosticiran bolest, a ne činjenica infekcije) za različitih bolesti.
- U obliku simbola - "+", "-" (+, ++, +++, ++++) "?".
- U kvalitativnu evaluaciju vrijednosti kriterij (pozitivan ili negativan).

Pravilno procijeniti koliko antitijela varijanta imunoglobulina identifikacije klase, i, samim tim, izlagati fazi bolesti i potrebu za samo doktor može liječiti.

Ne smijemo zaboraviti da je njihova "referentne vrijednosti" (embodiments norma), a iznad kojeg određeni dijagnosticirana bolest (varijante patologija) razvijen za bilo koji test sistem. "Referentne vrijednosti" za različite test sistema drugačije.

Ispravite uporede rezultati ELISA, preuzela vremena, moguće je samo u slučaju njihove proizvodnje u istom laboratoriju.